Поспілкуйтеся з нашим технічним спеціалістом

Ми тут, аби оперативно відповідати на ваші запитання та допомагати вам отримати максимальну користь від користування нашими продуктами. Обирайте будь-який зручний спосіб зв’язатися зі службою підтримки Біокор Текнолоджі.

 

Напишіть нам 

Обирайте зручний спосіб для оперативної відповіді
+38 (067) 552 48 14 support@biocor-tech.com

вайбертелеграммВотсап

Залиште запит тут

І ми з вами зв’яжемось

    Відправляючи цю форму, ви надаєте згоду на зберігання та обробку ваших персональних даних ТОВ “Біокор Текнолоджі”

    Питання стосовно наборів реагентів для виділення нуклеїнових кислот

    З якого біоматеріалу можна здійснити екстракцію нуклеїнових кислот наборами реагентів Biocore® Nucleo-M, Biocore® SpinFood DNA-50, Biocore® MagFood DNA-50?

    За допомогою набору реагентів Biocore® Nucleo-M можна здійснити екстракцію зі зразків плазми крові, сироватки крові, а також мазків з верхніх та нижніх дихальних шляхів, кон’юнктивального секрету, сперми, секрету простати, зішкрібів з цервікального каналу та уретри, виділеннь піхви, зішкрібів з виразково-ерозивних елементів, калу.

    Набори реагентів SpinFood DNA-50 та MagFood DNA-50 призначені для екстракції зразків з рослинного матеріалу, продуктів харчування та харчової сировини рослинного походження.

    Чи можливо здійснювати екстракцію нуклеїнових кислот з біоматеріалу, якого нема в переліку в інстукції до набору (-ів)?

    Виробник рекомендує здійснювати екстракцію нуклеїнових кислот виключно з переліку біоматеріалу, який наведений в інстукції до набору (-ів).

    Якщо біоматеріал, що Вас цікавить відсутній в інструкції до набору – Ви можете написати лист-звернення до технічної підтримки ТОВ «Біокор Текнолоджі ЛТД» з розширеним викладенням Вашого запиту.

    Які види нуклеїнових кислот можна виділити за допомогою наборів реагентів Nucleo-М, SpinFood DNA-50, MagFood DNA-50?
    Набір реагентів Nucleo-М призначений для екстракції тотальної РНК/ДНК. Набори реагентів SpinFood DNA-50 та MagFood DNA-50 призначені для екстракції тотальної ДНК.
    Яка тривалість екстракції нуклеїнових кислот при використанні наборів реагентів Nucleo-М, SpinFood DNA-50, MagFood DNA-50?
    Процес екстракції нуклеїнових кислот набором реагентів Nucleo-М триває приблизно 30 хв, наборами SpinFood DNA-50 та MagFood DNA-50 – 50-60 хв.
    Який об'єм елюції використовується при використанні наборів реагентів Nucleo-М/ SpinFood DNA-50/MagFood DNA-50?
    При використанні набору реагентів Nucleo-М об’єм елюції становить 50 мкл, наборів SpinFood DNA-50/MagFood DNA-50 – 100 мкл.
    Яка оптимальна температура та термін зберігання виділених нуклеїнових кислот?

    ДНК виділена за допомогою наборів реагентів Nucleo-М/SpinFood DNA-50/MagFood DNA-50 може зберігатись протягом 8 годин при температурі 0 °С, до 1 тижня при температурі ≤ -18 °С та більш тривале зберігання при температурі -70 °С.

    РНК виділена за допомогою набору реагентів Nucleo-М може зберігатись протягом одного тижня при температурі -20 °С та більш тривале зберігання при температурі ≤ -70 °С.

    Питання стосовно ампліфікаційних наборів

    Які методи екстракції рекомендовані для використання ампліфікаційних наборів?

    Для використання діагностичних наборів виробництва ТОВ “Біокор Текнолоджі ЛТД” екстракцію ДНК/РНК з біологічного матеріалу рекомендовано проводити за допомогою наборів реагентів Biocore® Nucleo-M (CM-NA203-100/500/1000), MagMAX™ Viral / Pathogen NA Isolation Kit (Applied Biosystems™) та NucleoMag® Virus kit RNA/DNA Isolation (MACHEREY-NAGEL).

    Для використання тест-систем для дослідження ГМО рекомендовано використовувати набори для виділення геномної ДНК з рослинного матеріалу (Biocore® SpinFood DNA-50, Biocore® MagFood DNA-50).

    Проте, не виключено використання інших комерційних наборів призначених для екстракції ДНК/РНК з відповідного біологічного матеріалу.

    Чи є особливості приготування реакційної суміші?
    Обов’язковим етапом проведення ПЛР з використанням наборів виробництва ТОВ “Біокор Текнолоджі ЛТД” є приготування реакційної суміші відповідно до кількості досліджуваних зразків, НКЗ, ПКЗ, СЗ тощо. Ми наполегливо рекомендуємо готувати реакційну суміш виходячи з кількості досліджуваних зразків, а не вносити компоненти (ПЛР-РЧ суміш, суміш праймерів та зондів (2х), Taq ДНК-полімеразу, ЗТ-ПЛР-РЧ суміш (4х)) окремо.
    Чи включають набори внутрішній контроль?
    Обов’язковим етапом проведення ПЛР з використанням наборів виробництва ТОВ “Біокор Текнолоджі ЛТД” є приготування реакційної суміші відповідно до кількості досліджуваних зразків, НКЗ, ПКЗ, СЗ тощо. Ми наполегливо рекомендуємо готувати реакційну суміш виходячи з кількості досліджуваних зразків, а не вносити компоненти (ПЛР-РЧ суміш, суміш праймерів та зондів (2х), Taq ДНК-полімеразу, ЗТ-ПЛР-РЧ суміш (4х)) окремо.
    Чи включають набори внутрішній контроль?

    З метою контролю проходження етапу виділення та ампліфікації в діагностичних наборах передбачений внутрішньоклітинний контроль – рибонуклеаза Р (RNase P).

    У наборах для визначення генетично модифікованих організмів є наступні внутрішньоклітинні контролі, залежно від рослинного матеріалу:

    • ген лектину (Lec) – для сої;
    • ген алкогольдегідрогенази (Adh1) – для кукурудзи;
    • ген круциферину (Cru) – для ріпаку;
    • ген chlDNA – для всіх рослин.
    Які ампліфікатори підходять для використання діагностичних наборів?
    Діагностичні набори та набори для визначення ГМО валідовано для використання на ампліфікаторах з системою детекції в режимі реального часу: QuantStudioTM 5 (Applied Biosystems, США), Rotor-Gene Q (Qiagen GmbH, Німеччина), CFX 96TM (Bio-Rad, США).
    Як здійснювати налаштування порогової та базової лінії?

    Для ампліфікаційних наборів виробництва ТОВ “Біокор Текнолоджі ЛТД” застосовується автоматичне налаштування порогової лінії кожного каналу детекції для лінійки приладів QuantStudioTM 5 (Applied Biosystems, США), Rotor-Gene Q (Qiagen GmbH, Німеччина), CFX 96TM (Bio-Rad, США).

    За необхідності порогову лінію можна виставити в ручному режимі. Для цього необхідно перемістити порогову лінію на початок експоненційної фази у випадку лінійного графіка або посередині експоненційної фази на логарифмічному графіку (Рис. 1).

    Базову лінію прилад також налаштовує автоматично. При наявності сильних шумів базову лінію необхідно налаштувати вручну. Для цього необхідно задати кінець базової лінії за 5 циклів до перетину з пороговою лінією, а початок – за 12 циклів від кінця базової лінії.

    Рис. 1 Побудова порогової лінії в ручному режимі

    Рис. 1 Побудова порогової лінії в ручному режимі

    Рис. 2 Побудова базової лінії в ручному режимі

    Рис. 2 Побудова базової лінії в ручному режимі

    Що робити якщо значення НКЗ не відповідають вимогам інструкції?
    При наявності кривих ампліфікації в НКЗ результати всієї постановки вважаються невалідними і потребують повторного проведення дослідження з етапу ампліфікації.
    Що робити якщо відсутній сигнал ПКЗ/СЗ?
    При відсутності флуоресцентного сигналу ПКЗ/СЗ рекомендовано перевірити всі етапи приготування реакційної суміші, правильного внесення ПКЗ/СЗ та провести повторне дослідження.
    Що робити якщо значення калібрувальної кривої (Efficiency 90-110%, R2 0.98-1, −3.6 ≥ Slope ≥ −3.3) не відповідають заданим параметрам?
    Відхилення значень Efficiency, R2, Slope свідчать про помилку при десятикратних розведеннях СЗ або неточне дозування СЗ/реакційної суміші. В такому випадку рекомендовано зробити нові десятикратні розведення та повторити експеримент.
    Які рекомендовані умови зберігання для стабільної роботи діагностичних тест-систем?
    Для стабільної роботи діагностичних наборів ми рекомендуємо зберігати компоненти набору при температурі мінус 18-24 °С, за виключенням ПКЗ, СЗ та розчину (-ів) для розведення СЗ, які зберігаються при температурі плюс 4-8 °С після першого розморожування.