Эволюция знаний о гепатите А: история, диагностика и современные методики

Еволюція знання про гепатит А: історія, діагностика та сучасні методики

Вирусный гепатит A – острое инфекционное заболевание печени, вызванное вирусом гепатита А. Вирус передается через инфицированную пищу и воду, ежегодно инфицируются около 10 миллионов человек. Гепатит A не имеет хронической стадии развития и обладает высокой патогенностью для человека. Для возникновения заболевания достаточно всего одного вириона. Вирус выделяется в большом количестве за 12-14 дней до появления желтухи и в течение 3 недель желтушного периода. Предотвратить заражение можно вакцинированием.

Морфология вируса гепатита А

Вирус гепатита A (ВГА) (Hepatovirus A, HAV) – вид вирусов рода гепатовирусов семейства пикорнавирусов. ВГА – мелкий и наиболее просто организованный вирус сферической формы, диаметром 20-30 нм, состоит из однонитчатой линейной плюс-ниточной РНК и капсида. Капсид имеет 60 белковых субъединиц, вложенных кубически. Не имеет наружной суперкапсидной оболочки. Без углеводов и липидов. В 2015 году было установлено его животное происхождение. Возник около 25 млн лет назад.

История вируса гепатита А

Желтуха была известна в древней Греции и Риме. Базовая наука о вирусах и клинические научные исследования связанных с ними заболеваний стремительно прогрессировали в 20-м веке. Нобелевский лауреат Петер Медавар лаконично и точно определил вирус как «кусок плохих новостей, завернутых в протеин». McDonald в 1908 году первым определил вирус как этиологический агент гепатита A.

Гепатит А. Этиология и эпидемиология

В 1931 ученые пришли к выводу, что данное заболевание вызывает “ультра-микроскопический вирус, который является патогенным только для человека”. H. C. Brown, один из авторов труда 1931 года, описывал болезнь характеристиками спорадического случая эпидемической желтухи. Он заболел через 5 недель после работы с сыворотками эпидемической желтухи. Временные рамки его симптомов соответствовали известному на сегодняшний день инкубационному периоду гепатита A и являются возможным первым документированием вирусемической сывороточной передачи эпидемического гепатита. 

Фактори ризику розвитку захворювання

Случаи ВГА регистрируют по всему миру. Самый высокий уровень серопозитивности (т.е. самый высокий уровень идентификации антител к HAVanti-HAV) отмечают среди взрослого населения Африки, Азии и Южной Америки, обычно течение инфекции бессимптомное. Важнейшими факторами, приводящими к высокому уровню заболеваемости, являются плохие санитарные условия и отсутствие надежных чистых ресурсов воды. Описанная в 1988 г. в Шанхае масштабная эпидемия ВГА была связана с употреблением населения моллюсков и охватила около 300 тыс. человек. Чем старше были пациенты с ВГА, тем чаще регистрировали случаи смерти от фульминантного (молниеносного) гепатита.

Детектирование и диагностика гепатита А

HAV был впервые визуализирован в конце 1970-х после агрегации фекального материала с сывороткой содержавшей гомологические антитела. Технику иммунной электронной микроскопии стула тогда использовали для анализа на специфические анти-HAV антитела в реконвалесцентной фазе сыворотки. RT-PCR амплификация была использована в 1994-1995 для идентификации специфических вирусных штаммов, задействованных в парентеральной передаче вируса. Техника гибридизации in situ была использована в 1994 году для локализации HAV последовательностей в биопсиях печени человека. Используя макрофаг-специфический маркер было подтверждено наличие вирусных НК в цитоплазме фагоцитарных клеток. Чувствительность, специфичность и положительную прогностическую величину количественного определения IgM-специфических anti-HAV были определены в 1979 году.

HAV сейчас может детектироваться различными иммунологическими и молекулярными техниками, включая радиоиммунологический анализ (RIA), DNA-RNA гибридизацию и PCR с обратной транскрипцией (RT-PCR). 

Лабораторная диагностика гепатита А

Лабораторна діагностика гепатиту А

Материал для исследований – сыворотка крови и стула. Помимо общего анализа крови; протромбинового времени; биохимического анализа крови, включает следующие методы диагностики:

Серологическая диагностика 

Проводится методом ИФА на основе обнаружения антител к ВГА. Выявление иммуноглобулинов М (IgM) с начала появления первых симптомов и последующих 6 мес. и антител anti-HAV IgG вскоре после появления anti-HAV IgM, они сохраняются в течение многих лет. Определение антител-HAV IgM является основным тестом специфической диагностики гепатита А. Наличие антител-HAV IgG при отсутствии anti-HAV IgM свидетельствует о перенесенной инфекции или вакцинации в прошлом, IgG против HAV также появляются в крови после введения вакцины против ВГА;

Молекулярно-генетическая диагностика ВГА

Обнаружение РНК HAV методом ПЦР, является золотым стандартом диагностики ВГА. Определяемым фрагментом является консервативный участок генома ВГА. Качественное определение ВГА методом ПЦР в крови позволяет подтвердить наличие вируса в организме больного и тем самым устанавливает этиологию заболевания. Аналитическая чувствительность метода ПЦР составляет не менее 80 вирусных частиц в 5 мкл пробы с выделенной РНК, специфичность — 98%.

Дифференциальная диагностика гепатита А

Патологическим состоянием, при котором прежде всего необходимо проводить дифференциальную диагностику ВГА, вирусный гепатит Е (ВГЕ). Оба заболевания характеризуются схожей клинической симптоматикой, одинаковым механизмом передачи. Другие заболевания, при которых необходимо проводить дифференциальную диагностику ВГА: медикаментозный гепатит; острая ВИЧ-инфекция; индуцированные применением лекарственных средств реакции гиперчувствительности; синдром Бадда — Киари; другие вирусные гепатиты; CMV. Исследования на антитела класса М к ВГА применяют для дифференциальной диагностики при наличии клинических признаков вирусного гепатита, для решения эпидемиологических вопросов (обследование контактных пациентов).

Читайте также Типы гепатитов

Маркеры гепатита А

Маркеры репликации вируса – антитела (IgM и IgG) к антигенам ВГА и вирусная РНК. 

  • Аnti-HAV IgM является маркером острой фазы заболевания.
  • Аnti-HAV IgG является маркером перенесенного острого гепатита А или поствакцинного иммунитета. 
  • РНК ВГА является первым диагностическим маркером острого гепатита А. Его выявление является информативным для выявления инфицированных среди контактных лиц.

Гепатит А — серйозное и распространенное заболевание. Компания Биокор Текнолоджи предлагает следующие наборы для определения РНК/ДНК гепатитов.

  • Набор диагностический «Biocore® HAV»  для определения РНК вируса гепатита А
  • Набор диагностический «Biocore® HВV»  для определения ДНК вируса гепатита В
  • Набор диагностический  «Biocore® HCV»  для определения РНК вируса гепатита С
  • Набор диагностический  «Biocore® HЕV»  для определения РНК вируса гепатита Е